细菌基因组DNA快速提取试剂盒

产品货号：

GS0060

中文名称：

细菌基因组DNA快速提取试剂盒

英文名称：

Rapid Bacterial gDNA Isolation Kit

产品规格：

50次|100次

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本试剂盒无需使用苯酚、氯仿等有毒试剂。从1mL过夜培养的细菌菌液可以获得10～30μg DNA，OD260/OD280比值一般为1.7~1.9。抽提出的DNA可用于酶切、PCR、文库构建、Southern blot等相关实验。

组分	50次	100次
Buffer Digestion	24mL	48mL
Buffer PB	12mL	24mL
TE Buffer (pH8.0)	10mL	20mL
Enzymatic lysis buffer	10mL	20mL

保存：室温干燥。

Buffer Digestion中含有刺激性化合物，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
Buffer Digestion在低温下可能产生沉淀，使用前请检查，如有沉淀，请于65℃溶解后使用。

自备材料：水浴锅、小型高速离心机（最大离心力≥ 12000×g）、1.5mL离心管、75%乙醇、异丙醇、RNase A溶液等。
提前将水浴锅调至65℃备用。

样品处理
- 革兰氏阴性细菌：取1mL过夜培养的细菌菌液，加入1.5mL离心管中，室温8000rpm离心1min，弃上清，收集菌体。加入400μL Buffer Digestion，震荡混匀。65℃水浴1h至细胞完全裂解。
- 革兰氏阳性细菌：取1mL过夜培养的细菌菌液，加入1.5mL离心管中，室温8000rpm离心1min，弃上清，收集菌体。加入180μL溶菌酶溶液（使用前将相应的溶菌酶加入到Enzymatic lysis buffer中，配置成20mg/mL的溶菌酶溶液）重悬菌液，37℃水浴30～60min，再加入400μL Buffer Digestion，震荡混匀。65℃水浴1h至细胞完全裂解。
- 水浴过程中，每10min颠倒混匀一次，可促进样品裂解。混合液变澄清透明为裂解完全。如溶液未变澄清，说明样品裂解不彻底，应适当延长水浴时间，否则将可能降低DNA的得率或导致提取的DNA不纯。
- 如需得到无RNA的DNA，可在水浴后加入20μL的RNase A（10mg/mL），室温放置2～5min。
加入200μL Buffer PB，充分颠倒混匀，-20℃冰箱放置5min。
室温10000rpm离心5min，将上清液(500～550μL)转移到新的1.5mL离心管中。
- 若上清液混浊，可再加入等体积氯仿混匀，12000rpm离心取上清。
加入等体积的异丙醇，颠倒5～8次使之充分混匀，室温放置2～3min。室温10000rpm离心5min，弃上清。
加入1mL 75%乙醇，颠倒漂洗1～3min，10000rpm离心2min，弃上清。
- 漂洗时一定要使沉淀悬浮起来。
重复步骤5一次。
开盖室温倒置5～10min至残留的乙醇完全挥发。
- 此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
- 如果残留的乙醇有挂壁现象，倒掉液体后再短暂离心，将残液用移液器吸出。然后开盖室温放置5～10min至残留的乙醇完全挥发。
得到的DNA用50～100μL TE Buffer溶解。提取的DNA可立即进行下一步实验或-20℃保存。
- TE Buffer为10mM Tris-HCl，1mM EDTA,pH8.0。

产品目录